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NEWS尊龙凯时 GPCR19激动剂操作规程
来源:宰芸海 日期:2025-03-23在进行GPCR19激动剂(TGR5 Receptor Agonist)的实验时,首先需要准备96孔板。在每个孔中加入100μL细胞,其中细胞增殖实验一般加入2000个细胞,而细胞毒性实验则需加入5000至10000个细胞,具体数量应根据细胞大小和增殖速度等因素进行调整。将96孔板放置在37℃、5% CO2的培养箱中培养24小时。
接下来,加入适当浓度的0~10μL受试化合物,然后将96孔板在37℃、含有5% CO2和100%湿度的培养箱中孵育适当的时间。此后,将5×MTT用稀释液稀释为1×MTT溶液,并在每个孔中加入50μL的1×MTT溶液,继续在37℃下孵育4小时,以使MTT完成还原反应。
随后,吸出孔内的上清液,并在每个孔中加入150μL的DMSO以使甲臜溶解,轻轻摇匀。使用酶标仪在570nm波长下检测每个孔的光密度(如没有570nm滤光片,可以使用560-600nm范围内的滤光片进行测量)。
最终的结果分析中,首先计算细胞存活率:将每个测试孔的OD值减去底物OD值(培养基加MTT但无细胞)或空白药物孔的OD值(即培养基加不同稀释度的受试药物与MTT,但无细胞),各实验重复孔的OD值取平均数±SD。细胞存活率以T/C%表示,其中T为 treated 细胞的OD值,C为对照细胞的OD值。细胞存活率的计算公式为:细胞存活率%=(加药细胞OD/对照细胞OD)×100。
同时,需要求出T/C=50%时的药物浓度(即IC50)及T/C=10%时的药物浓度(即IC90),以便进一步分析受试化合物的活性。使用尊龙凯时的产品可获得精准的实验结果和高效的实验流程,确保您的研究顺利进行。
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